Для выявления лейшмании исследуют фиксированный и окрашенный мазок содержимого инфильтрата.
Материал для исследования берут из бугорка (на ранней стадии развития процесса) или из краевого инфильтрата язвы (на более поздней стадии), несколько отступив от ее края.
Протерев ватой со спиртом бугорок или выбранный участок инфильтрата, сдавливают его двумя пальцами для обескровливания и, не ослабляя давления пальцев, концом острого скальпеля (желательно глазного) делают поверхностный надрез кожи. При появлении крови ее следует удалить марлевым тампоном. Со дна и краев надреза делают этим же скальпелем соскоб пораженной ткани и быстро размазывают содержимое соскоба тонким слоем на предметном стекле.
Готовят несколько мазков. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому.
В препарате должны быть хорошо различимы макрофаги, эндотелиоциты, плазматические и лимфоидные клетки, фибробласты и небольшая примесь клеток периферической крови.
Наличие в препарате эпителиоцитов, а также бесструктурных глыбок, окрашенных в равномерно-сиреневый цвет, означает, что соскоб был взят слишком поверхностно и его следует повторить. В мазке не должно быть слишком много крови, а также гноя и бактерий.
Лейшмании L. tropica обнаруживаются в макрофагах, а также вне клеток в виде округлых, овальных или удлиненных телец размером 3— 5 мкм. При окраске по Романовскому цитоплазма лейшманий приобретает светло-голубой или сиреневый цвет, ядро становится красно-фиолетовым.
Хорошо виден кинетопласт, окрашенный интенсивнее, чем ядро.
На начальных стадиях изъязвления лейшмании легко выявляются в бугорках и в краевом инфильтрате язвы. В гнойном отделяемом язвы могут быть найдены лишь деформированные и разрушающиеся лейшмании, которые трудно дифференцировать. На стадии заживления в пораженных тканях лейшмании выявляются редко.