Из костномозгового пунктата немедленно после взятия осторожно, чтобы не раздавить и не деформировать клетки,готовят тонкие мазки. Если пунктат плотный, делают отпечаток. При значительной примеси крови в пунктате из него выделяют на стекле маленькие беловатые жировые комочки, если они различимы, и готовят из них мазки.
Приготовленный мазок высушивают на воздухе, затем фиксируют, как мазки крови. Сухие фиксированные мазки могут храниться несколько дней.
На мазок наливают разведенный в буфере краситель Романовского (примерно 3—5 мл) и оставляют на 30— 50 мин. После окраски препарат споласкивают дистиллированной водой, высушивают и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.
В разгар заболевания лейшмании обычно находятся в костномозговом пунктате в значительном количестве и поэтому обнаружить их легко. Однако на ранней стадии болезни и у леченых больных для того, чтобы выявить возбудителя, требуется длительный просмотр всего мазка (не менее 40 мин).
Лейшмании обнаруживаются в макрофагах либо внеклеточно в виде округлых или рисовидных телец диаметром 3—5 мкм. Цитоплазма окрашена в серовато-голубой цвет, а ядро — в красновато-фиолетовый. В цитоплазме размещается кинетопласт — округленное или палочковидное образование, окрашенное интенсивнее ядра.
За лейшмании иногда принимают кровяные пластинки или «осколки» клеток (комочки цитоплазмы, содержащие ядерное вещество), встречающиеся в мазках костного мозга, посторонние микроорганизмы (например, одноклеточные водоросли), попавшие в мазок во время окраски. В мазке они окрашиваются интенсивнее, чем лейшмании (темно-синяя цитоплазма и ярко-малиновое ядро), кинетопласт отсутствует.